2-8℃

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

一年

WB,IP等

植物

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至1小時(shí)。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

WB,IP等

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

1. 提取液準(zhǔn)備：
每500ul冷的提取液A中加入4ul蛋白穩(wěn)定劑和2ul蛋白酶抑制劑和10ul葉綠素去除劑，混勻后置冰上備用。
2. 取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的100-200mg鮮嫩植物組織樣本用刀盡可能剪碎，加入500ul提取液A后用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。
3. 將勻漿液吸入一個(gè)預(yù)冷的干凈離心管中在4℃振蕩30分鐘-1小時(shí)。
4. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管， 加入5ul葉綠素去除劑，充分混勻，在4℃振蕩10分鐘。
6. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
7. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到植物總蛋白。
8. 上述蛋白提取物請(qǐng)分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取時(shí)出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的核蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

1.Na Zhao, Xinyue Xu, Yashitola Wamboldt, Sally A. Mackenzie, et al.
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 67 (1): 435-444. （IF=5.677）

2.XiaokangLi, LiMu, DandanLi, et al.
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）