一、 探針標(biāo)記
原位標(biāo)記：僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。
1. 按照1:1000-2000用無血清培養(yǎng)基稀釋O06探針。
2. 去除細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS洗細(xì)胞一次。
3. 加入適當(dāng)體積稀釋好的O06探針。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜，通常對(duì)于六孔板的一個(gè)孔加入稀釋好的O06探針不少于1毫升。
4. 在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育20分鐘。
5. 用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的O06探針。

收集后標(biāo)記：懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞消化處理
1. 按照1:1000用無血清培養(yǎng)基稀釋O06探針。
2. 離心移除培養(yǎng)基，用PBS洗細(xì)胞一次。
3. 細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的O06探針中，細(xì)胞濃度為1*106-2*107/毫升，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細(xì)胞充分接觸。
4. 用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的O06探針。
5. 用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

二、 檢測(cè)：
對(duì)于原位標(biāo)記探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
熒光強(qiáng)度強(qiáng)，活性氧強(qiáng)度高。
對(duì)于收集細(xì)胞后標(biāo)記探針的樣品可以用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。

使用488 nm激發(fā)波長(zhǎng)，525 nm發(fā)射波長(zhǎng)，實(shí)時(shí)或逐時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)刺激前后熒光的強(qiáng)弱。O06探針的熒光光譜和FITC非常相似，可以用FITC的參數(shù)設(shè)置檢測(cè)。