-20℃保存

1、長(zhǎng)期存放請(qǐng)分裝后-20℃保存。
2、避免反復(fù)凍融。
3、凍存后溶解時(shí)注意重新混勻。

一年

1. PBS、培養(yǎng)液
2. 顯微鏡
3. 離心機(jī)

1) 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。
2) 在使用細(xì)胞消化液的過(guò)程中，要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。
3) 細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。
4) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

1. 貼壁細(xì)胞的消化：
（1） 吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌PBS、培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞1次；
（2） 加入少量無(wú)酶細(xì)胞消化液，略蓋過(guò)細(xì)胞即可。（一般按細(xì)胞的有效體積的10倍添加）
（3） 室溫放置10min （如置于37℃脫壁反應(yīng)會(huì)加速），直至細(xì)胞脫壁。（不同細(xì)胞消化時(shí)間有差異）。亦可用顯微鏡觀察，如果細(xì)胞明顯收縮并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍頭吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除消化液。
（4） 加入細(xì)胞培養(yǎng)液或5倍體積的PBS緩沖液終止反應(yīng)。如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則再加入無(wú)酶細(xì)胞消化液重新消化。
（5） 1000-2000g離心3-5min，沉淀細(xì)胞，棄上清，盡量吸除無(wú)酶細(xì)胞消化液，加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2. 組織的消化：
（1） 用無(wú)菌PBS、培養(yǎng)液洗滌組織1次，用無(wú)菌的刮勺或茶匙將剪碎的組織碎片轉(zhuǎn)移至合適容器。
（2） 按組織有效體積的5-10倍，加入無(wú)酶細(xì)胞消化液。
（3） 置于37℃作用4-48小時(shí)，無(wú)需振蕩，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。對(duì)于較難分解的腫瘤細(xì)胞，可作用5天或更長(zhǎng)時(shí)間，但應(yīng)重新用消化液懸浮。
（4） 吹打組織碎片數(shù)次，釋放松散的細(xì)胞，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶或皿，倒置顯微鏡下檢查分離情況。當(dāng)細(xì)胞量少和/或在組織碎片中仍可見(jiàn)細(xì)胞時(shí)，需要繼續(xù)消化。
（5） 1000-2000g離心3-5min，沉淀細(xì)胞，棄上清，盡量吸除無(wú)酶細(xì)胞消化液，加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。