基質(zhì)金屬蛋白酶13（MMP-13）活性檢測(cè)試劑盒（熒光）

簡(jiǎn)要描述：產(chǎn)品概述 product description

產(chǎn)品型號(hào)：
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間：2025-10-17
訪問(wèn) 量：173

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產(chǎn)品分類

CLASSIFICATION

細(xì)胞分析

檢測(cè)試劑盒細(xì)胞成像細(xì)胞自噬細(xì)胞代謝 ROS檢測(cè) 細(xì)胞活性細(xì)胞增殖細(xì)胞周期細(xì)胞凋亡細(xì)胞抑制劑細(xì)胞粘附細(xì)胞pH檢測(cè) 細(xì)胞耗氧與酸化細(xì)胞示蹤與追蹤離子指示劑及膜電位查看全部產(chǎn)品

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詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃避光

注意事項(xiàng)

1.MMP-13 底物短期 4℃避光保存，長(zhǎng)期-20℃避光保存:。 2.MMP-13 底物在冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。融解后離心至管底部再打開螺旋蓋。 3.可以用手捂住使其融解或 37℃短時(shí)間水浴， 4.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。 5.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完。

有效期

一年

檢測(cè)方法

熒光酶標(biāo)儀/熒光光度計(jì)

適用樣本

細(xì)胞/組織

儀器準(zhǔn)備

1.熒光酶標(biāo)儀/熒光光度計(jì)； 2.離心機(jī)； 3.移液器； 4.冰箱； 5.冰盒；

試劑準(zhǔn)備

1.PBS; 2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管； 2.吸頭； 3.一次性手套； 4.熒光檢測(cè)專用的黑色96孔板

使用注意事項(xiàng)

1.37℃下反應(yīng)如果顏色變化不明顯，可以適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。 2.如果樣品中蛋白含量低，加大樣品量，裂解樣品時(shí)需設(shè)法使樣品中的蛋白量達(dá)到 200-500 ug每樣。 3.如果樣品中激活的MMP水平很低，適當(dāng)調(diào)節(jié)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的時(shí)間，找一個(gè) MMP 激活比較強(qiáng)的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。 4.MMP-13 底物避光保存，使用過(guò)程中盡量避光。 5.底物為 DMSO 溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。 6.使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使 DMSO 溶液集中于管底。 7.酶標(biāo)儀檢測(cè)必須使用熒光檢測(cè)專用的黑色 96 孔板。

使用方法

一、裂解緩沖液和檢測(cè)緩沖液配制根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)準(zhǔn)備裂解緩沖液和檢測(cè)緩沖液，每1ml緩沖液中加入 10 ul DTT 充分混勻置冰上備用。二、樣品處理 A.細(xì)胞樣品 1.收集 5x10（6次方）個(gè)細(xì)胞，在 4℃，500xg 條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。 2.用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。 3.在細(xì)胞中加入 50 ul冷的裂解緩沖液，高速渦旋振蕩15 秒。 4.置冰上持續(xù)振蕩 20-45 分鐘。 5.在 4℃，12000xg 條件下離心 15 分鐘。 6.快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，置于冰上保存?zhèn)溆? B組織樣品 1.取適量組織樣本剪碎，按照每 50 mg/100 ul冷的裂解緩沖液，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見固體，冰上振蕩 20-45 分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。 2. 在 4℃，12000xg條件下離心5分鐘。 3.快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆? 三、對(duì)上述處理過(guò)的上清進(jìn)行蛋白定量。【注】: 1.必須進(jìn)行蛋白定量，以保證后續(xù)步驟的蛋白上樣量足夠，否則容易出現(xiàn)檢測(cè)不到結(jié)果的情況。 2.用 BCA 蛋白定量試劑盒進(jìn)行定量的話，裂解液中不要加入 DTT。四、MMP1活性檢測(cè) 1.取 50ul 裂解上清(含 100-200 ug 蛋白)，加入 45ul 檢測(cè)緩沖液。 2.再加入 5 ul MMP-8 熒光底物，充分混勻，在 37℃下避光反應(yīng) 1-2 小時(shí)。 3.熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。Ex=325 nm，Em=400 nm。 4.根據(jù)凋亡的細(xì)胞的熒光值與對(duì)照細(xì)胞樣本的熒光值的比值計(jì)算相對(duì)的MMP1 活性程度變化。

常見問(wèn)題分析

熒光強(qiáng)度值偏低 1.樣品上樣量不夠:本方法檢測(cè)需要的細(xì)胞數(shù)量須在3x10（6次方）以上，或者新鮮組織 50 mg 以上，每次反應(yīng)的蛋白量需要在 100 μg 以上。如果量不夠，請(qǐng)?jiān)黾蛹?xì) 胞或組織的量。 2.樣本不新鮮:使用新鮮的細(xì)胞或組織樣本。 3.樣品裂解不夠充分:細(xì)胞或組織需要進(jìn)行充分裂解，可以加入適當(dāng)?shù)牡? 白酶抑制劑混合物裂解，裂解后應(yīng)無(wú)明顯大量的沉淀，以保證有效獲得蛋白。 4.樣品中激活的 MMP-8 水平偏低:首先確認(rèn)模型的凋亡現(xiàn)象是否明顯，以及根據(jù)文獻(xiàn)和其他驗(yàn)證方法確認(rèn)該凋亡是否激活 MMP-8。 5.檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)的選擇是否合適:不論哪種通路的凋亡，需要在MMP-8被有效激活并達(dá)到相應(yīng)活化程度后的一定時(shí)間范圍內(nèi)檢測(cè)，過(guò)早或過(guò)晚均不合適。 6.不適合本方法檢測(cè):某些凋亡誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的凋亡可能是非依賴于 MMP-8活化的機(jī)制，此種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè) MMP-8無(wú)明顯變化，需要考慮凋亡機(jī) 制的其他通路。

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